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細(xì)胞刮刀的實(shí)驗(yàn)步驟你要了解嗎
點(diǎn)擊次數(shù)：6452 更新時(shí)間：2019-03-07
細(xì)胞刮刀表面是一個(gè)新型的細(xì)胞培養(yǎng)處理表面，增加了表面濕潤(rùn)的持久性和細(xì)胞吸附的穩(wěn)定性超低吸附板的特征是共價(jià)結(jié)合的水凝膠層將細(xì)胞吸附、蛋白吸附和細(xì)胞的激活降到較低具有凝聚環(huán)的不可逆的蓋減少污染，統(tǒng)一邊角方便堆放帶有字母單孔識(shí)別，平底經(jīng)過(guò)細(xì)胞吸附化處理（標(biāo)注產(chǎn)品除外）經(jīng)過(guò)伽馬射線滅菌，經(jīng)過(guò)無(wú)熱源認(rèn)證。
細(xì)胞刮刀的刀片是由高分子材料TPE制成，長(zhǎng)柄是由高分子材料ABS制成，主要是適用于收獲細(xì)胞，其優(yōu)化設(shè)計(jì)，確保對(duì)細(xì)胞損傷，并盡可能接觸細(xì)胞生長(zhǎng)的所有器皿表面。用于人工收獲細(xì)胞，優(yōu)化設(shè)計(jì)確保對(duì)細(xì)胞較小的傷害并盡可能接觸細(xì)胞生長(zhǎng)的所有表面。細(xì)胞刮刀常用于從培養(yǎng)皿中收獲細(xì)胞（尤其是干細(xì)胞）。
細(xì)胞刮刀實(shí)驗(yàn)步驟：無(wú)菌條件下取新生小牛大腦皮層灰質(zhì)部，4℃D-Hank′s液洗滌4次，至無(wú)血跡殘留。剪成1mm3左右的組織碎塊并置于玻璃勻漿器內(nèi)，加入兩倍體積的MEM培養(yǎng)基，勻漿上下20次？勻漿液先用100目（直徑149μm）尼龍網(wǎng)布式漏斗抽濾，培養(yǎng)基洗滌4次，收集濾液。然后用200目（直徑74μm）尼龍網(wǎng)布式漏斗抽濾，MEM培養(yǎng)基洗滌4次。細(xì)胞刮刀收集200目尼龍網(wǎng)上的組織（即牛腦微血管），將其置于離心管中，1500r/min離心洗滌10min。離心洗滌的腦微血管懸浮于的0.1%膠原酶中，旋渦振蕩15sec以充分混勻，置于37℃恒溫振蕩水浴箱中振蕩消化50min，取出后旋渦振蕩15sec，1500r/min離心10min，棄上清，用20%BCS的培養(yǎng)基懸浮，接種于明膠鋪被的培養(yǎng)瓶中（培養(yǎng)瓶中加入1%明膠-D-Hank′s液洗滌3ml，37℃孵箱中放置24h，用前倒掉明膠溶液即得明膠覆蓋的培養(yǎng)瓶），置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中，37℃、5%CO2、飽和濕度條件下培養(yǎng)。靜置5～7天后，可見(jiàn)少量細(xì)胞生長(zhǎng)，20%BCS的MEM培養(yǎng)液換液，以后每2～3天換液一次，至細(xì)胞長(zhǎng)成致密單層后可傳代培養(yǎng)。
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